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本试剂盒是专为RNA样本的LAMP扩增反应设计，制品中Bst4.0+ DNA Polymerase中包含Bst 2.0 DNA聚合酶、极其耐热的反转录酶、RNase Inhibitor，在RNA的LAMP扩增中无需再加入任何其它酶制品即可用于RNA的LAMP扩增。除此外，Bst4.0+ DNA Polymerase中不含有甘油成分，因此可用于建立LAMP引物mix与酶制品的冻干品，以提高LAMP检测制品的稳定性和易用性。本试剂盒含可视化的反应指示剂，扩增完毕后阳性样品为黄色，阴性样品为红色。

2.5μL Bst4.0+ Polymerase包含8U Bst2.0 DNA聚合酶、20U耐热反转录酶、8U RNase抑制剂、22%海藻糖。本制品不含甘油，可用于冻干。

• 对成功建立LAMP检测方法至关重要的四个参数分别是：引物位置、引物使用浓度、反应温度（60～65℃）和反应时间。引物使用浓度、反应温度是优先要确认的参数，如经过参数调整后仍不能达到检测用标准，则重新设计引物组合，再进行测试。
  
• 在用于其它恒温扩增反应时（如CPA、SMAP等），可参考如上策略进行使用，反应时间可能会需要调整。
  
• 关于矿物油的使用，在配制完LAMP反应体系后，可加入一滴矿物油覆盖于反应液上部，以减少气溶胶的污染。

• 在0.2mL EP反应管中加入下述试剂配制RT-LAMP反应体系
  

  成分	用量
  2×ROY IsoAmp Buffer	10μL
  Bst4.0+ Polymerase	2.5μL
  10×LAMP Primer Mix	2μL
  模板RNA	X μL
  ddH2O	至20μL

  • 10×LAMP Primer Mix浓度：FIP/BIP 16μM each、LoopF/B 4μM each、F3/B3 2μM each。
• 置于60～68℃（首次实验采用65℃）进行反应20～45min。
  
• 结果判断：肉眼观察结果，黄色为阳性，红色为阴性。
  
  • ROY染料红黄变色反应依赖于反应体系中pH的变化来实现，因此模板中Tris盐、NaOH等成分对反应有至关重要的影响。在采用核酸纯化的样本检测时，推荐使用ddH2O进行洗脱，在使用粗制样本时建议使用ddH2O保存的样本进行检测。

• 引物及酶制品的冻干（可参考）
  

  成分	用量
  Bst4.0+ DNA Polymerase	2.5μL
  10×LAMP Primer	2μL
  45%海藻糖	0.5μL
  总体积	5μL

  将该制品进行冻干处理，获得冻干品。
  
• 冻干制品的LAMP扩增
  向一份冻干品中加入10μL的2×ROY IsoAmp Buffer溶解冻干制品，并加入最多10μL的检测RNA模板，总体积为20μL。进行LAMP扩增。